北京睿博兴科生物技术有限公司
北京睿博兴科生物技术有限公司
北京睿博兴科生物技术有限公司

荧光定量PCR技术

简介

实时荧光定量PCR 技术(Real-Time Quantitative PCR)是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性分析。在实时荧光定量PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,从而通过荧光强度变化监测产物量的变化。本公司主要提供目前使用较多的SYBR Green I 荧光染料法和Taqman 探针法。

相关技术的三个基本概念

基线(Baseline)

PCR 扩增反应的最初几个循环里,荧光信号变化不大,接近一条直线,即是基线。一般来讲,第3-15 个循环的荧光值就是基线。

荧光阈值(Threshold)

阈值一般是基线的荧光信号标准差的10 倍,荧光阈值设定在PCR 扩增的指数期。

CT 值(Ct value)

Ct 值表示的是每个PCR 反应管内荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。

相同模板在同一台PCR 仪上相同条件下重复96 次扩增的扩增曲线图可以看出终点处检测产物量不恒定,但是Ct 值则极具重现性。

研究表明,各模板的Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct 值就越小,反之亦然。利用已知起始拷贝数(绝对量)的的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数(绝对量)的对数,纵坐标代表Ct 值。因此,只要获得未知样品Ct 值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数(绝对量)。


1. 技术流程


2. 结果展示

扩增曲线


标准曲线的扩增曲线

溶解曲线(SYBR Green I 法



标准曲线(绝对定量)

3. 可提供的服务

(1) 核酸提取(包括基因组DNA、RNA、cDNA反转录)

(2) 引物设计及合成

(3) 制备标准品质粒

(4) 标准曲线

(5) qPCR扩增及荧光信号采集

4. 送样要求

Total RNA/gDNA:50 ng/ul 以上,至少20ul,条带无降解。需低温运输

细胞: 107以上,需收集细胞沉淀,干冰运输

细菌/酵母菌:107以上,需收集菌体,完全去除培养液,立即放入液氮中,放-80℃冰箱冻存,干冰运输

组织:300mg以上,需干冰运输

血液:>1ml,需干冰运输

叶片:>100mg,需干冰运输

5. 公司提供的结果

(1) 原始数据(excel表)

(2) 实验报告(包括扩增曲线、融解曲线(SYBR Green I 法)、原始数据、标准曲线(绝对定量)、相对定量结果的柱状图等相关信息

荧光定量PCR项目电子订单

6. 联系我们

技术支持电话: 180 0102 7002

E-mail:support@ruibiotech.com

地址:北京市大兴区亦庄经济开发区地盛东路1号爱普益大厦2幢401




我们的公司

名称:北京睿博兴科生物技术有限公司

电话:010-81766077(总部)

项目:support@ruibiotech.com

测序:seq@ruibiotech.com

引物:dna@ruibiotech.com

基因:gene@ruibiotech.com

STR: str@ruibiotech.com

青岛分公司、广州分公司、哈尔滨分公司

地址:北京市昌平区北七家镇立汤路64号