北京睿博兴科生物技术有限公司
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TA克隆

简介

TA克隆是把PCR片段与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。通过PCR的方法扩增目的基因片段的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片段通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列。由于在PCR过程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分为2种情况:

使用不同的Taq酶,在PCR扩增循环结束后,加上72℃ 10分钟一个过程,Taq酶可以在扩增产物的   3末端加上A,因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。

使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A,因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板,加上一定量的普通Taq酶和反应液,加入dATP(或dNTP), 72℃ 10分钟,然后将加A产物直接用于TA连接。

本公司采用的载体既适用于Taq系列DNA聚合酶扩增的末端加“A”片段的克隆,也适用于pfu、KOD等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆,方便高效。

1. 技术流程


2. 结果展示

黄色区域为T载序列,白色区域为目的PCR产物序列。

3. 可提供的服务

(1) PCR扩增(包括PCR产物的纯化)

(2) TA克隆

(3) 一代测序

4. 送样要求

(1) 基因组DNA浓度20-30ng/ul以上,OD260/280在1.7-2.1左右,电泳有基因组主带。冰袋运输

(2) 已纯化PCR产物:浓度>50ng/μl,总体积>20μl。冰袋运输

(3) 未纯化PCR产物:浓度>50ng/μl,总体积>30μl。冰袋运输

5. 公司提供的结果

(1) 一代测序结果(可提供去除载体序列服务)

(2) 电泳胶图

TA克隆项目电子订单

6. 联系我们

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